提供多因子多组学相关检测分析的实验服务专家
ELISA检测
服务特色
酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合特异性进行免疫反应的定性和定量检测方法。ELISA可以检测包括细胞因子，生长因子，蛋白酶，可溶性受体，凋亡效应因子和许多其他小分子等，主要包括的方法有：双抗体夹心法，间接法和竞争法等。
测试样本类型
血液（血清、血浆）、组织匀浆（暂不检测肝肾组 织）、细胞裂解液、细胞培养上清、尿液、粪便、 肺泡灌洗液、唾液、脑脊液等
服务优势
拥有专业团队和丰富经验，提供专业技术支持和指导。
严格规范的SOP，确保实验过程无误。
包含真实的原始数据、专业结果分析、实验相关器材。
服务流程
注意事项
周期：一般按收到样本后的两周内给检测数据；
样本储存：不要反复冻融，样本处理后可分装密封保存，4℃保存应小于1周，-20℃不应超过2个月，-80℃不应超过1年；
样本管标记：在样本管盖或管壁标记样本名称及体积，管口以封口膜封好，防止污染；
样本体积要求：按照每个检测孔至少需要100μl体积，以及预实验需求，实验是否复孔来准备；
样本邮寄要求： 干冰运输
样本干冰邮寄顺丰；>15kg 干冰（1-2 天）>20kg 干冰（2-3 天）>30kg 干冰（3-4 天）
邮寄地址：湖北省武汉市东湖新技术开发区流芳路光谷芯中心二期咸宁(武汉)离岸科创园-A区崇阳楼-205
联系人：王梦雅
联系电话：13283726026
血清和血浆要求是离心处理后的澄清样本，组织样本需研磨裂解后提供裂解液上清进行测试。用不同袋子装好并在袋子表面标注血清或血浆样本及样本数量，如果样本很多，最好放在样本管架上摆放整齐再邮寄。
为保证公司员工安全，本公司不检测具有传染性疾病的样本(如果因为隐瞒样本的传染性风险，导致我司员工的人身安全，我司将保留追究其法律责任的权力)。
报告示例
相关资源
科研及诊断ELISA试剂盒应用领域
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应用领域 |
示例 |
意义 |
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生物医学研究 |
生物分子机制研究、信号通路、药效评估 |
深入研究疾病分子机制、指导药物研发和治疗 |
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免疫学研究 |
免疫反应评估、疫苗评估、肿瘤免疫研究 |
助力免疫学机制研究、疫苗研发、肿瘤治疗 |
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临床诊断 |
标志物、病毒蛋白 |
疾病筛查与检测、疗效评估 |
ELISA试剂盒的制备流程
1、抗原或抗体的选择：选择合适的抗原或抗体，并进行配对验证。
2、固相材料的包被：将抗原或抗体溶液包被在固相材料（如酶联免疫吸附板）上，形成固定的捕获层。
3、样品处理：对待测样品进行预处理，如稀释、去除干扰物等。
4、标准曲线制备：准备一系列已知浓度的标准样品，用于构建标准曲线。
5、样品和标准的加入：将待测样品和标准样品加入包被好的固相材料中。
6、免疫反应：让样品中的目标分子与固相材料上的抗原或抗体发生免疫反应，形成免疫复合物。
7、洗涤：通过洗涤步骤去除非特异性结合物质，保留特异性结合物质。
8、标记物的加入：加入与待测分子结合的标记物（如酶标记的二抗或底物）。
9、底物的加入：加入适当的底物，使标记物发生化学反应产生可检测的信号。
10、信号检测与分析：使用合适的仪器（如酶标仪）检测底物反应产生的信号，并根据标准曲线计算出待测样品中目标分子的浓度。
样本处理方法
样本的处理对于多因子/ ELISA 等免疫检测实验的成功起着关键的作用。样本的处理过程实际就是收集目标蛋白的过程， 因蛋白容易变性、降解，因此在样本处理的过程应尽量温和。
利用多因子/ ELISA 技术进行检测的样本类型包括：血液（血清、血浆）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清、 尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液等。 常见的样本处理 常规方法如下供参考：
血清是 ELISA/多因子实验最常用的样本，其预处理也十分简单。
使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在室温下放置 2 小时或 4℃过夜，分离出血清（建议倾斜试管以扩大液面的横截面，使血清可以更大程度地分离出来）；
4℃下以 1000×g 离心 20 分钟，小心收集上清液（血清），立即进行测定 。建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存，避免反复冻融。在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA/多因子实验中将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还应避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性 HRP，也会导致检测结果不准确。
2.血浆
使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本；
采集后 30 分钟内，4℃下以 1000×g 离心 15 分钟，小心收集上清液（血浆）。
建议在-20℃或-80℃下将收集的血浆分装保存，避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。常见的抗凝剂包括 EDTA(部分酶相关指标不建议使用），肝素钠，枸橼酸钠等。检测前请仔细阅读 ELISA/多因子试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。
3.细胞样本：细胞培养上清 细胞密度要求：
使用 96/24/6 孔板，（贴壁或悬浮）细胞密度达到 60-90%。
使用 6-10mm 培养皿，T25/T75 细胞培养瓶，（贴壁或悬浮）细胞密度达到 60-90%。
上清收集方法：悬浮细胞：2-8℃, 2500rpm 离心 5min ，收集澄清的细胞培养上清。
贴壁细胞：直接收集上清液，2-8℃, 2500rpm 离心 5min ，收集澄清的细胞培养上清。
收集的细胞培养上清，立即用于检测，或分装于-80℃冻存备用，避免反复冻融。
4.细胞样本：细胞裂解液
悬浮细胞：
2-8℃, 2500rpm 离心 5min ，收集细胞。
加入预冷的 PBS,轻轻混匀，2-8℃, 2500rpm 离心 5min ，收集细胞。
加入 0.5-1ml 中等强度 RIPA 细胞裂解液(注意 RIPA 裂解液 PH 值需为PH7.3，建议不要使用含 NP-40 ，Triton X-100 和高浓度 DTT 的组分 ，会抑制抗原抗体反应。若无 RIPA 裂解液，可使用 50mM Tris+0.9%NaCL,PH 7.3)及适量蛋白酶抑制剂（如 PMSF，工作浓度 1mmol/L）, 置于冰上，裂解 30min-1h。裂解过程中可用枪头吹打或间断摇动离心管，使蛋白充分 裂解, 出现黏糊状是 DNA，可以使用超声波破碎 DNA。（或用超声波 3-5mm 探头，功率 150-300W, 冰上超声处理样品，工作 1-2 s ，停止 30 秒， 3~5 个循环。）
裂解或超声破碎完成， 2-8℃, 0000rpm 离心 10min，上清移入 EP 管中。
为便于统计分析数据，需先使用 BCA 试剂盒定量总蛋白 ，一般调整总蛋白浓度至1-3mg/ml。立即 用于检测，或分装于-80℃冻存备用。
贴壁细胞：
吸走上清液，加入预冷的 PBS 洗三次。
加入 0.5-1ml RIPA 细胞裂解液及适量蛋白酶抑制剂（具体要求同悬浮细胞） ，用细胞刮轻轻刮下贴壁细胞。
细胞悬液转入离心管中，置于冰上，裂解 30min-1h，或者配合超声波破碎（同悬浮细胞）。
裂解或超声破碎完成， 2-8℃, 10000rpm 离心 10min，上清移入 EP管中。
为便于统计分析数据，需先使用 BCA 试剂盒定量总蛋白 ，一般调整总蛋白浓度至1-3mg/ml。立即用于检测，或分装于-80℃冻存备用。
细胞培养上清液/细胞裂解液的选择：
根据目的物所在部位，可选择细胞裂解液或细胞培养上清作为样本。如果目的物是分泌型，（包括可分泌型的膜蛋白），即可选择细胞培养上清作为样本；如果目的物主要存在于胞内，则建议选择细胞裂解液作为样本类型，部分包内蛋白也可能通过分泌或者细胞凋亡而泄露到培养基中而上清也可被检测。
5.组织匀浆
用洁净的工具解剖目标组织，尽快置于冰上，以防被蛋白酶降解。（暂不处理的组织，放于圆底微量离心管中，浸入液氮中“速冻” ，在 -80℃ 下存储样品备用）
取适量组织块，用预冷的 PBS（ 0.01mol/L ，PH7.4 ）冲洗组织以除去表面残留的血液 或杂质,称重后备用。若组织块较大，需先剪碎。
将组织块称重，一般以 1g 为基准，然后切成尽可能小的碎块，以便充分匀浆。
匀浆的比例选取 10%，玻璃匀浆管中加入预冷的 PBS（体积取决于组织的重量 ，9 mLPBS 适用于 1 g 组织 ，建议使用前立即在 PBS 中加入适量蛋白酶抑制剂 ，如 PMSF）进行充分研磨（有条件实验室可选用机器匀浆/超声粉碎） ，该过程需在冰上或冰浴中进行；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复 2 次）。
将制备好的匀浆液吸入离心管中，4℃下以 5000×g 离心 5~10 分钟，收集上清液，保存至-20℃或-80℃，避免反复冻融。
如果样本需要长期保存，请添加蛋白酶抑制剂 。根据实验需要，组织匀浆样本可取上清液进行蛋白定量，统一将蛋白调整成统一浓度（建议样本蛋白浓度至少 1mg/mL 以上），以便于统计分析数据。
6.痰液
选取痰液较为粘稠部分称重，加两倍于痰量的 0.1% DTT (二硫苏糖醇,主要作用是溶解粘液) ，反复吹打，漩涡器振荡 15s ，37 ℃恒温水浴振荡 5 分钟；
加两倍于痰量的 PBS 缓冲液, 继续振荡 15 分钟， 150 目的金属丝网过滤， 1500 rpm 离心 10 分钟吸取上清液检测。
7.唾液/尿液/牛奶
用无菌管收集样品，2-8℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。 或 2000-3000rpm 离心 20 分钟 ，收集上清 液，可立即检测，或分装冻存于-20℃或-80℃。尽量减少冻融循环。
8.粪便
尽量采集干的粪便，粪便过稀会较难处理且降低检测的准确性。采集的重量应大于 10g。
将粪便用 PBS 洗 3 次 ，离心收集沉淀后称重。
加入 PBS 缓冲液（加入 PBS 缓冲液的体积取决于处理后粪便的重量。 一般情况下，每 1 克粪便应使用 9ml PBS 缓冲液），用超声粉碎（或捣碎）。
5000 ×g 离心 10 分钟，取上清检测。 或分装冻存于-20℃或-80℃备用。
9.精浆
将精液收集于无菌容器中，在室温或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纤维蛋白溶解酶的作用下液化变得稀薄。
待精液完全液化后，将精液于 4000 rpm 离心 10 分钟分离精浆 ，进行检测，或分装冻存于-20℃或-80℃备用。
10.脑脊液、肺泡灌洗液，滑膜液，腹水采集样品
脑脊液、肺泡灌洗液，滑膜液，腹水采集样品,于 1000 ×g 离心 20 分钟，收集上清，可立即检测，或分装冻存于-20℃或-80℃。尽量减少冻融循环。
11.乳汁
采集样品,在 2-8℃下 12000rpm 离心 30 分钟，去除上层脂肪，以及下层沉淀，取中间层样本用于检 测。 或分装冻存于-20℃或-80℃。尽量减少冻融循环。
12.外泌体
采用商用外泌体抽提试剂盒提取外泌体颗粒。 如获得的外泌体浓度比较低，可使用超滤管浓缩。
加入 0.5ml 中等强度 RIPA 细胞裂解液 (注意 RIPA 裂解液 PH 值需为 PH7.3，建议不要使用含 NP-40 ，Triton X-100 和高浓度 DTT 的组分 ，会抑制抗原抗体反应。若无 RIPA 裂解液，可使用 50mM Tris+0.9%NaCL,PH 7.3)及适量蛋白酶抑制剂（如 PMSF，工作浓度 1mmol/L） , 置于冰上裂解 30min。裂解过程中可用枪头吹打或间断摇动离心管，使蛋白充分裂解。（或用超 声波 3-5mm 探头，功率 150-300W, 冰上超声处理样品，工作 1-2 s ，停止 30 秒， 3~5 个循环。）
裂解或超声破碎完成，2-8℃, 10000rpm 离心 10min，上清移入 EP 管中。
为科学的统计分析数据，需使用 BCA 试剂盒定量总蛋白 ，一般统一调整总蛋白浓度至 1-3mg/ml。立即用于检测，或分装于-80℃冻存备用。
小提示
样本处理之后的储存也非常重要，注意不要反复冻融。样本处理之后可分装密封保存，最佳保存条件： 2-8℃保存应小于 5 天， -20℃不应超过 6 个月， -80℃不应超过 2 年，超过以上时间应保存在液氮中。
